瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒原理簡介
本試劑盒利用*的緩沖液，可從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段，同時除去其它有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質。
對于切下后不超過150mg的凝膠塊，本試劑盒（以100T為例）可用100T。對于更小的凝膠塊，本試劑盒使用次數更多。

注意事項
1、電泳時使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
2、如下一步實驗要求較高，則應盡量使用TAE電泳緩沖液。
3、切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷。
4、回收<200bp DNA片段時，應加大溶膠液的體積（如5倍體積或者更高）。
5、回收率與初始DNA量和洗脫體積有關，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。
6、如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。
操作步驟
1．將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取凝膠重量(可以用同一包裝中的離心管去皮稱量，各離心管間的誤差可忽略)。
2．向膠塊中加入3倍體積溶膠液（如果凝膠重為0.1g，其體積可視為100µl，則加入300µl溶膠液，如為小片段，可加入5倍體積或者更高體積），50-55℃水浴放置5-10分鐘，其間不斷溫和地上下翻轉離心管，以確保膠塊充分溶解。
3．玻璃奶混勻。取25ul混勻的玻璃奶加入上面溶解的溶膠液中。混勻。
4．室溫放置2-3分鐘。期間可翻轉混勻1-2次。
5．10000轉/分鐘離心1分鐘，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振蕩混勻，10000轉/分鐘離心1分鐘，去上清，70%乙醇重復洗一次，再用無水乙醇洗一次。去上清，再次離心2分鐘，用小吸頭吸去上清（70%乙醇洗兩次，無水乙醇洗一次）。
6．室溫放置10分鐘，加入30－50ul TE緩沖液混勻溶解，50-55℃水浴5分鐘。離心，取上清轉移到一新的離心管中。此為所提質粒。
7．電泳或者其他方法檢測，進入下游實驗。